Proceso de purificación de proteínas recombinantes: Optimización en la etapa de centrifugación del Antígeno del virus de la Hepatitis B

Abstract

El presente trabajo fue realizado en la planta de producción del antígeno de Hepatitis B (HBsAg) del laboratorio Sanofi ubicado en el parque industrial de Pilar, en donde el mismo es sintetizado para luego ser exportado a la planta ubicada en Marcy l’Etoile, Francia. En estas instancias, se logra el producto final, la cual es una vacuna pediátrica hexavalente que se encuentra ampliamente distribuida a varios países del mundo, incluida Argentina. El proceso de producción recientemente escalado debido a la demanda de la vacuna se encuentra atravesado por el concepto de mejora continua, es por eso que el equipo de Tecnología de Proceso (MTECH – Manufacturing Technology), el cual es considerado el dueño del proceso de elaboración, a la búsqueda de diferentes estrategias con el objetivo de optimizar etapas y mejoras en el rendimiento del proceso. Este estudio se llevó a cabo sobre una de las etapas de purificación de la proteína de interés cuyo sistema de expresión es a través de cultivos de levaduras, llamada “Precipitación con PEG” cuyo fin es obtener un sobrenadante libre de contaminantes (proteínas y restos celulares). En base a la información obtenida de bibliografía sobre la teoría de la centrifugación y en la experiencia previa sobre el proceso de producción, los ensayos planteados consistieron en modificaciones de parámetros de configuración de los equipos utilizados, en este caso la centrífuga (centrífuga continua, modelo CARR® Powerfuge® P12), así como también modificaciones de parámetros de proceso tales como la velocidad de alimentación y la cantidad de producto procesado en cada ciclo de centrifugación. La industria farmacéutica está altamente regulada y es por eso por lo que los procesos de elaboración de medicamentos están registrados y aprobados por las autoridades regulatorias de los países en donde se comercializan y el margen de acción para realizar modificaciones en los procesos de producción está acotados a los rangos aprobados. A pesar de las limitaciones que significa aplicar reformas en el desarrollo de un fármaco por fuera los rangos permitidos, los resultados obtenidos en los distintos estudios llevados a cabo fueron promisorios en cuanto a que se lograron mejoras en la etapa de centrifugación respecto del punto de partida. De esta manera, el proceso (scrape regulado) pudo ser incorporado de manera definitiva al proceso de producción en el laboratorio lo que significó una reducción del valor de OD600nm de 0,323 u.a. (de 1,286 a 0,963 u.a.) y un aumento del porcentaje de pureza de IEC de 1,1% (de 74,94 a 76,01%). Así mismo, otros datos obtenidos brindaron cierta información empírica permitiendo conocer cómo se comporta el proceso de elaboración frente a cambios en los parámetros de proceso y como posibles mejoras a implementar en un futuro, por ejemplo, la implementación del proceso de 12 ciclos de centrifugación permitiría reducir el valor de OD600nm en 0,491 u.a. (de 1,286 a 0,795 u.a.) y consecuentemente un incremento del porcentaje de IEC de 4,0% (de 74,94 a 78,97%).